Alexa Fluor 647 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（遠(yuǎn)紅）使用說(shuō)明書(shū)

Alexa Fluor 647-Phalloidin, Alexa Fluor647 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

產(chǎn)品描述

鬼筆環(huán)肽是從一種菌類(lèi)Amanita Dhalloides所提取出來(lái)的環(huán)肽。它與F-actin競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合。熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結(jié)合并且易溶于水，為檢測(cè)組織切片，培養(yǎng)細(xì)胞和無(wú)細(xì)胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標(biāo)記方法。

本品為Alexa Fluor647標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽，可發(fā)出高亮度、穩(wěn)定的遠(yuǎn)紅外熒光，染色反應(yīng)特異性強(qiáng)，對(duì)比性高，適合用作F-actin的定性和定量檢測(cè)。與Actin抗體比較，Alexa Fluor647 鬼筆環(huán)肽具有如下優(yōu)點(diǎn)：1）與actin亞單位一比一結(jié)合，并且不與G-actin結(jié)合，具有比Actin抗體更好的染色效果；2）且本品的結(jié)合沒(méi)有物種差異性，適用性廣泛；3）鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的非特異性信號(hào)可忽略，因而圖像的反差較好；4）染色與用于細(xì)胞分析的其他熒光染色*兼容，包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他Alexa Fluor偶聯(lián)物（包含Alexa Fluor偶聯(lián)二抗）；5）經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。

技術(shù)資料

1. Ex(nm)：650

2. Em(nm)：665

3. 分子量：約2200

4. 溶劑：DMSO

5. 結(jié)構(gòu)式：

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。收到貨后-20℃避光干燥保存，1年有效。

使用方法：

1.   準(zhǔn)備1000x DMSO Alexa Fluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽存儲(chǔ)液

用301µL DMSO 溶解粉末狀A(yù)lexa Fluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽，可按需分裝并于-20℃避光干燥保存，分裝保存，避免反復(fù)凍融。

2.   準(zhǔn)備1x Alexa Fluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液

吸取1µL 1000×Alexa Fluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽存儲(chǔ)液到1ml 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。

注意：不同的細(xì)胞染色狀況不同，相應(yīng)Alexa Fluor 647鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。

3. 細(xì)胞染色步驟

1）細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜或更長(zhǎng)，使其密度達(dá)到50-60%匯合度。

2）吸掉培養(yǎng)液，37℃預(yù)熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細(xì)胞2次。

3）使用含有3-4%甲醛的PBS溶液進(jìn)行細(xì)胞固定，室溫固定10-30min。

注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^(guò)程中可能破壞肌動(dòng)蛋白。

4）室溫條件下，用PBS清洗固定好的細(xì)胞2~3次，每次10min。

5）（可選）：室溫條件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min，從而增加其通透性。

注意：鬼筆環(huán)肽的分子量小，很容易通過(guò)細(xì)胞，一般情況下不需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。

6）室溫條件下，用PBS清洗細(xì)胞2~3次，每次10min。

7）每孔加入 Alexa Fluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液100µl/孔（96孔板），室溫避光染色20-90min，夏季時(shí)間相對(duì)短些。

8）用PBS清洗細(xì)胞3次，每次5min，去除掉多余的Alexa Fluor 647標(biāo)記鬼筆環(huán)肽。

9）（可選）：加入足量的即用型DAPI溶液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，如：100µl/孔（96孔板），室溫3~5min。用PBS清洗細(xì)胞2次，每次5min。

10）于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察，選擇Alexa Fluor 647激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=650/665nm）和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。