Alexa Fluor 488 標記鬼筆環(huán)肽（綠色）使用說明書

Alexa Fluor 488-Phalloidin, Alexa Fluor488 標記鬼筆環(huán)肽

產(chǎn)品描述

鬼筆環(huán)肽是從一種菌類Amanita Dhalloides所提取出來的環(huán)肽。它與F-actin競爭性的結合。熒光標記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結合并且易溶于水，為檢測組織切片，培養(yǎng)細胞和無細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標記方法。

本品為Alexa Fluor488標記的鬼筆環(huán)肽，可發(fā)出高亮度、穩(wěn)定的綠色熒光，染色反應特異性強，對比性高，適合用作F-actin的定性和定量檢測。與Actin抗體比較，Alexa Fluor488 鬼筆環(huán)肽具有如下優(yōu)點：1）與actin亞單位一比一結合，并且不與G-actin結合，具有比Actin抗體更好的染色效果；2）且本品的結合沒有物種差異性，適用性廣泛；3）鬼筆環(huán)肽標記的非特異性信號可忽略，因而圖像的反差較好；4）染色與用于細胞分析的其他熒光染色*兼容，包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他Alexa Fluor偶聯(lián)物（包含Alexa Fluor偶聯(lián)二抗）；5）經(jīng)本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。

技術資料

1. Ex(nm)：493

2. Em(nm)：517

3. 分子量：1900

4. 溶劑：DMSO

5. 結構式：

運輸與保存方法

冰袋運輸。收到貨后-20℃避光干燥保存，1年有效。

使用方法：

1.   準備1000x DMSO Alexa FluorTM 488標記鬼筆環(huán)肽存儲液

用30µL DMSO 溶解粉末狀Alexa FluorTM 488標記鬼筆環(huán)肽，可按需分裝并于-20℃避光干燥保存，分裝保存，避免反復凍融。

2.   準備1x Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽工作液

吸取1µL 1000×Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽存儲液到1ml 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。

注意：不同的細胞染色狀況不同，相應Alexa Fluor 488鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。

3. 細胞染色步驟

1）細胞培養(yǎng)過夜或更長，使其密度達到50-60%匯合度。

2）吸掉培養(yǎng)液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。

3）使用含有3-4%甲醛的PBS溶液進行細胞固定，室溫固定10-30min。

注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

4）室溫條件下，用PBS清洗固定好的細胞2~3次，每次10min。

5）（可選）：室溫條件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min，從而增加其通透性。

注意：鬼筆環(huán)肽的分子量小，很容易通過細胞，一般情況下不需對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。

6）室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。

7）每孔加入 Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽工作液100µl/孔（96孔板），室溫避光染色20-90min，夏季時間相對短些。

8）用PBS清洗細胞3次，每次5min，去除掉多余的Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽。

9）（可選）：加入足量的即用型DAPI溶液對細胞核進行復染，如：100µl/孔（96孔板），室溫3~5min。用PBS清洗細胞2次，每次5min。

10）于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，選擇Alexa FluorTM 488激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=493/517nm）和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。