PEI轉(zhuǎn)染試劑常見(jiàn)問(wèn)題

Q：C4058L1080和C4058L1090有什么區(qū)別？

A：我們有兩種，80是針對(duì)線性的，90是支鏈轉(zhuǎn)染，比如慢性病包試劑用90比較好。  

Q：李記細(xì)胞轉(zhuǎn)染液和PEI固體自行配制溶液相比的優(yōu)勢(shì)在哪里？

A：很多客戶買固體很難把握的，固體非常不容易溶解，包裝比較大，用的不多建議您選液體的，已做無(wú)菌處理，可以直接使用。

Q：接種細(xì)胞，必須用膠原酶消化？胰酶不能用么？

A：膠原酶從細(xì)菌中提取出來(lái)的酶，對(duì)膠原有很強(qiáng)的消化作用，適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織，它對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用，對(duì)細(xì)胞本身影響不大，可使細(xì)胞與膠原成分脫離但不受傷害。膠原酶消化的不是細(xì)胞表面，而是細(xì)胞間質(zhì)。

         胰酶消化作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽腱，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架，從而使細(xì)胞分離。對(duì)細(xì)胞有輕微影響，進(jìn)而影響后續(xù)轉(zhuǎn)染效率及細(xì)胞活性，在一定程度上體現(xiàn)為轉(zhuǎn)染試劑的毒性。

Q：使用方法提到，轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)將復(fù)合物（40ul質(zhì)粒稀釋液+40ul 轉(zhuǎn)染試劑稀釋液）滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。此時(shí)含細(xì)胞的培養(yǎng)皿里面有含血清的培養(yǎng)基么？如果有，體積是多少？以24孔板為例，是0.5ml么？

A：培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基成分為正常培養(yǎng)細(xì)胞的成分，原來(lái)培養(yǎng)時(shí)有血清，那就有。培養(yǎng)孔中培養(yǎng)液的體積也是正常情況，你說(shuō)的對(duì)，如果是24孔板，那么體積應(yīng)該是0.5ml

Q:轉(zhuǎn)染細(xì)胞步驟中提到，去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液之后呢？要加含血清的培養(yǎng)基么？加多少，以24孔板為例？加完培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)？培養(yǎng)多久？

A:去除含復(fù)合物的培養(yǎng)基，過(guò)程是逐步的，有兩個(gè)目的，一是盡可能提高轉(zhuǎn)染效率，二是盡可能降低細(xì)胞毒性。減少EZ Trans-DNA復(fù)合物的過(guò)程，也是恢復(fù)到細(xì)胞正常培養(yǎng)基成分的過(guò)程。后續(xù)培養(yǎng)多久，說(shuō)明書為建議時(shí)間，你可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)摸索，要根據(jù)你的轉(zhuǎn)染效率，基因表達(dá)情況確定。

Q:轉(zhuǎn)染細(xì)胞步驟中提到，這里的7h，指的是去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液換成含血清的培養(yǎng)基之后的7h，還是指加入復(fù)合物后轉(zhuǎn)染7h?- 同樣的，“24-48小時(shí)內(nèi)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率”指的是去除含復(fù)合物的培養(yǎng)液換成含血清的培養(yǎng)基之后的24-48h，還是指加入復(fù)合物后轉(zhuǎn)染24-48h？

A:所有時(shí)間都是從EZ Trans-DNA復(fù)合物與細(xì)胞接觸開(kāi)始算.