EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑與EZ 慢病毒系列/細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟

轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品描述

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。

本產(chǎn)品經(jīng)過李記生物的優(yōu)化處理，具有轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低，操作簡單，重復(fù)性好，適用范圍廣等特點。

以下為高效轉(zhuǎn)染試劑說明書，其他產(chǎn)品詳情請問銷售人員。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑與慢病毒訂購信息

轉(zhuǎn)染試劑運輸與保存

藍(lán)冰運輸。4℃保存，有效期12個月。【注】：不可冷凍！

高效轉(zhuǎn)染試劑使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表1）

1. 接種細(xì)胞

對于貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板，每500 µL生長培養(yǎng)基中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。

2. 準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物

（1）對于每孔細(xì)胞，將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），混勻。

（2）對于每孔細(xì)胞，將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），輕輕混勻。

【注】：無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。

（3）將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進(jìn)行。

（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。

（2）在37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。

【注】：篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋10倍以上），在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

公司簡介

　　上海李記生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售為一體的高科技生物技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品涵蓋細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、動物學(xué)等，我們的產(chǎn)品都基于設(shè)計，在保證品質(zhì)的前提下，具有易用、經(jīng)濟(jì)、高效的特點。
　　我們立志做百年企業(yè)，我們愿與您一同成長，很多我們的產(chǎn)品創(chuàng)意來自于像您一樣的客戶老師，我們提供的不僅是產(chǎn)品，還有一個創(chuàng)新平臺，我們期待您的參與，攜手發(fā)展，共創(chuàng)輝煌。實現(xiàn)中國夢，是全民族的事，生命科學(xué)領(lǐng)域中的你我同樣肩負(fù)使命，讓我們用不同的方式貢獻(xiàn)自己的力量！

　　李記優(yōu)勢產(chǎn)品：蛋白Marker、EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染液、CCK-8細(xì)胞活性增殖檢測試劑、支原體快速檢測試劑盒、核酸染料（GelRed）、EZ Protein any KD PAGE蛋白電泳試劑盒、熒光染料（Alexa Fluor 488, 555, 647,CY3, cy5）、胎牛血清、細(xì)胞凋亡檢測試劑盒、細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟等。

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