Hoechst 33258 *超級純*使用說明書

Hoechst 33258 *超級純*

產(chǎn)品描述：

Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對細(xì)胞的毒性較低，在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst 33258為特異性DNA染料，與A-T鍵結(jié)合，這種染料對死細(xì)胞或經(jīng)70%冷乙醇固定的細(xì)胞可立即染色。而活細(xì)胞的著色是漸進(jìn)性的，在10min內(nèi)可達(dá)飽和。在熒光顯微鏡下，活細(xì)胞核呈彌散均勻熒光，出現(xiàn)細(xì)胞凋亡時，細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見濃染致密的顆粒塊狀熒光。Hoechst 33258常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測，也可以用于普通的細(xì)胞核和線粒體的顯像觀察。

Hoechst經(jīng)常用來代替其它核酸染料如DAPI，這兩種染料關(guān)鍵的不同點(diǎn)在于，與DAPI相比，Hoechst 33258具有更強(qiáng)的親脂性，因此能更好的透過完整的細(xì)胞膜。用于細(xì)胞核染色時，推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。

技術(shù)參數(shù)：

光學(xué)性質(zhì)：Ex(nm)：352      Em(nm)：461

化學(xué)參數(shù)：分子量：533.88   溶劑：Water        CAS：23491-45-4

使用方法：

1.緩沖液制備。用PBS或合適的緩沖液制備10～50µM Hoechst 33258染色液。

2.固定的細(xì)胞或組織染色。對于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。依次按步驟進(jìn)行免疫熒光染色，和Hoechst33258染色。如果不進(jìn)行免疫熒光染色，則直接按步驟進(jìn)行Hoechst33258染色。

a)對于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細(xì)胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

b)吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長460nm。

3.活細(xì)胞或組織染色

a)細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液，對于96孔板一個孔需加入100μl染色液。

b)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。

c)用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長460nm。。

運(yùn)輸與保存方法：

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。-20℃干燥避光保存，保質(zhì)期12個月。

注意事項(xiàng)

1.  Hoechst 33258溶于水，溶解度可達(dá)20μM(約10mg/ml)。您也可直接購買20μM的液體規(guī)格產(chǎn)品（貨號:C5480L1100）。

2.  Hoechst 33258對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。

3.  熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。