Smart Cell 線粒體染色試劑盒Orange使用說明書

SmartCell 線粒體染色試劑盒Orange(同Mitotracker Orang)

產(chǎn)品描述

線粒體(mitochondrion)是一種存在于大多數(shù)真核細胞中的兩層膜結(jié)構(gòu)的細胞器，是細胞中的“能量工廠”(cellular power plants)",生產(chǎn)了細胞所需的大部分ATP，除了為細胞提供能量外，還涉及諸如細胞分化、細胞信息傳遞和細胞凋亡等過程，并擁有調(diào)控細胞生長和細胞周期的能力。已有文獻報道，線粒體還與線粒體失調(diào)癥、心臟功能障礙、衰老等人類疾病有關(guān)。盡管大部分細胞遺傳物質(zhì)DNA在細胞核內(nèi)，但線粒體擁有獨立的基因組，呈現(xiàn)母性遺傳?；谝陨咸攸c，線粒體是生物、生命科技領(lǐng)域的研究熱點。

Smart Cell染色試劑盒是Life-iLab公司專門研發(fā)的一類熒光成像工具，試劑盒設(shè)計嚴謹，需人為手動操作的步驟很少。可用來標記細胞器、亞細胞等結(jié)構(gòu)，例如細胞膜、線粒體、線粒體和細胞核等。

Smart Cell線粒體染色試劑盒可以標記活細胞中的線粒體，使之帶橙色熒光(Ex/Em =545/575 nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物，屬線粒體選擇性染料，該染料能輕易進入活細胞內(nèi)，通過線粒體膜電位變化滲透進入線粒體，并在線粒體中富集。Smart Cell線粒體染色試劑盒提供了標記線粒體的全套試劑，能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨使用，也支持對細胞的多重熒光分析。這種的細胞標簽為從空間上和時間上研究發(fā)生的細胞活動提供了一種十分有效的方法。

試劑盒組分

使用方法 

 1. 準備線粒體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘，預熱MitoView Orange染料(Component A)。 

1.2 取20µL預熱好的MitoView Orange染料(Component A)，用10 mL活細胞染色緩沖液(Component B)進行稀釋。 

注意：1) 20μL MitoView Orange染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實驗，剩余的MitoView Orange染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃，避免反復凍融。2)*染料濃度根據(jù)具體應(yīng)用會有不同，染色條件根據(jù)細胞類型、細胞或組織的染料滲透性不同可以進行調(diào)整優(yōu)化。

2. 細胞染色 

2.1 貼壁細胞：在96孔板（100μL）或培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)細胞，當細胞達到70-80%融合度，在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細胞30分鐘-2小時。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長培養(yǎng)基按1:1)替換色染液。同TRITC設(shè)置在顯微鏡下進行熒光觀察。

注意：如果細胞沒有充分染色，可以適當增加染料濃度或增加染色時間進行改善

2.2 懸浮細胞: 在1000 rpm 條件下離心細胞培養(yǎng)液5分鐘，棄去上清，用預熱好的細胞培養(yǎng)液溫和的重懸細胞，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細胞30分鐘-2小時。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長培養(yǎng)基按1:1)替換色染液。同TRITC設(shè)置在顯微鏡下進行熒光觀察。

圖1：HeLa 細胞用SmartCell線粒體染色試劑盒Orange染色后進行成像分析

（所用96孔板為Costar black）