Recombinant Enterokinase重組腸激酶使用說(shuō)明書

Recombinant Enterokinase重組腸激酶

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

腸激酶（Enterokinase）是一種絲氨酸蛋白酶，高度專一性識(shí)別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列，在Lys的C端水解多肽/融合蛋白，去除融合標(biāo)簽，釋放出目的蛋白。但天然腸激酶來(lái)源有限，并且從動(dòng)物組織提取的腸激酶污染有其他蛋白酶，這給實(shí)際應(yīng)用帶來(lái)了困難。重組腸激酶（rEK）是高純度的牛腸激酶輕鏈亞基，它有著和天然提取的腸激酶同樣特異的切割酶活性，且切割速率更快。重組腸激酶（rEK）被廣泛地應(yīng)用于基因工程產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，其應(yīng)用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等研究。

本產(chǎn)品為采用重組酵母分泌表達(dá)的高純度、高活性的牛腸激酶，適用范圍廣（4～45℃，pH4.5～9.5），并且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。因經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE膠檢測(cè)僅可見(jiàn)清晰單一的目的條帶。本制品不含有非特異性的蛋白酶切活性。

技術(shù)參數(shù)

運(yùn)輸與保存方法

-20℃保存，冰袋運(yùn)輸。質(zhì)保期12個(gè)月

使用方法（參考舉例）

1. 反應(yīng)體系構(gòu)建，以1000μl為例，反應(yīng)體系如下：

注：10 x rEK反應(yīng)緩沖液配方：0.5M Tris-HCl，pH 8.0（22℃），10mM CaCl，1% Tween-20。

2. 酶切反應(yīng)， 25 °C過(guò)夜酶切。

3. （可選）重組腸激酶的去除，后續(xù)如需去除重組腸激酶，可用陰離子交換樹(shù)脂（eg.DEAE-FF）對(duì)其進(jìn)行洗脫。推薦洗脫條件如下：

平衡緩沖液：25mM Tris-HCl pH8.0

洗脫緩沖液：25mM Tris-HCl pH8.0，含100mM NaCl

注：① 如果使用純化柱，注意流速不要太快。確保樣品與膠的接觸時(shí)間不少于10min。也可以直接將膠加入到酶切緩沖液中直接動(dòng)態(tài)吸附30min。② 如酶切緩沖液中含有其他成分，如NaCl，甘油等，會(huì)影響吸附效果。

注意事項(xiàng)

1．如果樣品溶液中含如下成分的一種或多種，且含量大于所列數(shù)值，為獲得理想的酶切結(jié)果，請(qǐng)先將樣品透析到1×反應(yīng)緩沖液中，然后再進(jìn)行酶切實(shí)驗(yàn)。

>2M Urea，>250mM NaCl，>20mM β-ME，>0.1% SDS，>50mM imidazole。

2）磷酸鹽對(duì)Enterokinase有很強(qiáng)的抑制作用，痕量的磷酸鹽都會(huì)嚴(yán)重影響Enterokinase的活性，因此在酶切體系內(nèi)不能存在磷酸鹽。