EvaGreen PCR核酸染料（20X水溶液） 使用說(shuō)明書(shū)

EvaGreen PCR核酸染料(20X水溶液)

EvaGreen™核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合熒光染料,是一種新一代用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）的DNA結(jié)合染料。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個(gè)單體染料分子通過(guò)一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體，在沒(méi)有DNA存在時(shí)，該結(jié)構(gòu)呈無(wú)熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu)，一旦有DNA出現(xiàn)，則恢復(fù)隨機(jī)形態(tài)并與DNA結(jié)合發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光。

與市場(chǎng)上其他熒光染料如SYBR Green I 相比，EvaGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn)：1）高靈敏度：在推薦濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I 更強(qiáng)的PCR擴(kuò)增信號(hào)。2）PCR抑制性小，非常適合多重PCR及HRM分析。過(guò)量染料形成二聚體，而不游離，使得EvaGreen對(duì)PCR的抑制遠(yuǎn)小于SYBR Green I。因此，使用EvaGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。同時(shí)，EveGreen在實(shí)驗(yàn)中可以使用較高的濃度，從而獲得遠(yuǎn)強(qiáng)于SYBR Green I擴(kuò)增信號(hào)。EvaGreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線分析(HRM)。3）高穩(wěn)定性：在正常的儲(chǔ)存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì)被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲(chǔ)存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。4）安全性好：細(xì)胞膜穿透性測(cè)試表明，EvaGreen幾乎不能穿透細(xì)胞膜，安全性高。5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時(shí)不許改變光譜元件設(shè)置，也無(wú)需改變操作步驟，qPCR完成后，無(wú)需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。

此外，EvaGreen是目前僅有的可以用于微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)的染料，在微流控PCR，恒溫?cái)U(kuò)增，毛細(xì)管電泳，DNA定量以及細(xì)胞活力鑒定等領(lǐng)域也具有的表現(xiàn)。本品以20×EvaGreen水溶液形式提供。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。4 ºC干燥避光保存，保質(zhì)期12個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1）做qPCR時(shí)注意設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

光學(xué)性質(zhì)

激發(fā)波長(zhǎng)= 500 nm

發(fā)射波長(zhǎng)= 530nm

 實(shí)驗(yàn)方法

PCR反應(yīng)的配制（50uL）

注意事項(xiàng)

1)  請(qǐng)根據(jù)不同的儀器類(lèi)型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據(jù)所使用的Taq酶的不同進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化；

2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量于冰上向無(wú)菌離心管中依次加入水，Taq polymerase buffer, dNTPs, MgCl2, EveGreen, Taq polymerase, and primers等配制qPCR反應(yīng)體系（1×Master mix）；

3）將1×Master mix 適量分裝至無(wú)菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應(yīng))；

4）按照儀器類(lèi)型選擇合適的擴(kuò)增程序。