2 x Taq PCR Master Mix 使用說明書

2 x Taq PCR Master Mix

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

2 × Taq PCR Master Mix是即用型的常規(guī)PCR預(yù)混合溶液，含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及優(yōu)化的緩沖體系，它以2×的濃度形式存在，反應(yīng)時(shí)只需加入所需引物和模板，用水稀釋即可立刻配制完P(guān)CR體系。本產(chǎn)品中含有PCR產(chǎn)物具有3’-dA突出端，可輕松克隆至T載體。

運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。收到產(chǎn)品后放到-20 ºC保存，有效期12月以上。

使用方法

1.  反應(yīng)體系配制（50μl）：

注：針對(duì)不同模板的*反應(yīng)濃度有所不同，下表為50μl反應(yīng)體系推薦模板使用量，僅供參考。

2.  PCR循環(huán)反應(yīng)條件

注：退火溫度需要根據(jù)引物的Tm值調(diào)整，一般設(shè)置成低于引物Tm值1-2℃即可。

注意事項(xiàng)
1.由于Taq DNA Polymerase室溫下也有一定的反應(yīng)活性，PCR反應(yīng)體系配制需在冰上進(jìn)行。體系混勻后快速置于PCR儀進(jìn)行反應(yīng)。這樣可以減少反應(yīng)準(zhǔn)備階段的非特異擴(kuò)增，有助于得到更好的PCR結(jié)果。
2. 引物設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)
2.1 引物3’端zui后一個(gè)堿基選擇C或G，端zui后8個(gè)堿基應(yīng)避免出現(xiàn)連續(xù)錯(cuò)配；端盡量避免發(fā)卡結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)；
2.2 引物Tm值控制在55℃-65℃之間；
2.3 引物額外附加序列，即與模板非配對(duì)序列，不應(yīng)參與引物Tm值計(jì)算；
2.4 引物GC含量控制在40%-60%之間；
2.5 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。