D-熒光素鉀鹽使用說(shuō)明書(shū)

D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽*（超純）

產(chǎn)品描述

D-Luciferin Free acid, potassium salt, and sodium salt *UltraPure Grade*D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個(gè)生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機(jī)制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過(guò)量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見(jiàn)下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，導(dǎo)入研究動(dòng)物如大小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過(guò)生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來(lái)檢測(cè)光強(qiáng)度變化，從而實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對(duì)此反應(yīng)體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強(qiáng)度的變化來(lái)指示能量或生命體征。

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報(bào)告基因分析；高通量測(cè)序和各種污染檢測(cè)。目前市場(chǎng)上有三種產(chǎn)品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產(chǎn)品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無(wú)毒性，特別適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。配成液體后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應(yīng)用上都沒(méi)有實(shí)質(zhì)性的差別。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，保質(zhì)期12個(gè)月。

使用方法

1．體外生物發(fā)光檢測(cè)

1）用蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成100 mM的儲(chǔ)存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。

2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基1:200稀釋儲(chǔ)存液，配制工作液（終濃度150µg/ml）。

3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無(wú)殘留。

4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在37℃短時(shí)間孵育后檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào)）。

2．    活體成像分析

1）用無(wú)菌的DPBS（w/o Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽工作液（15mg/ml），0.2µm濾膜過(guò)濾除菌?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b于-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

 2） 注射量取決于注射方式，具體如下：

3） 注射入體內(nèi)10-20 min（待光信號(hào)達(dá)到zui強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期），再進(jìn)行成像分析。

注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定zui高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。

 注意事項(xiàng)

1) 本品（firefly luciferin）和甲蟲(chóng)熒光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，僅僅是不同公司在命名上的差異。

2) 本品保存和操作的過(guò)程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過(guò)濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸?，穩(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng)，長(zhǎng)達(dá)1年。

3) 注射方式，動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定*信號(hào)平臺(tái)期和*的檢測(cè)時(shí)間。

4) 熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒(méi)有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來(lái)看，鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。

5) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

1、 熒光素可以用于動(dòng)物活體嗎？

答：我們?cè)S多客戶用熒光素作用于動(dòng)物活體，目前世界上合成熒光素主要有兩大生產(chǎn)商，因此目前您使用的就是這兩種生產(chǎn)商其中之一生產(chǎn)的。請(qǐng)注意：Promega出售的熒光素是Beetle Luciferin，而我們公司出售的是Firefly Luciferin，但這兩種的結(jié)構(gòu)是相同的（結(jié)構(gòu)式如下）。

2、 怎么溶解熒光素？溶解后怎樣使它穩(wěn)定？

答：許多客戶已經(jīng)告訴我們熒光素溶于水中，然后分裝好保存于-80℃，不會(huì)有重大的影響。然而，關(guān)于溶解后熒光素的穩(wěn)定性也有相矛盾的報(bào)道。對(duì)于大多敏感的實(shí)驗(yàn)，為了減少一些實(shí)驗(yàn)中的可變因素我們強(qiáng)烈建議您現(xiàn)配現(xiàn)用（比如低濃度的酶或者不合適的反應(yīng)溫度或不合適的鹽濃度等等可能需要高濃度的底物來(lái)驅(qū)使反應(yīng)的完成。）