真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)，高效轉(zhuǎn)染試劑使用方法

EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽(yáng)離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)李記生物的優(yōu)化處理，具有轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，適用范圍廣等特點(diǎn)。

以下為真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)：

轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存，有效期12個(gè)月。【注】：不可冷凍！

高效轉(zhuǎn)染試劑使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請(qǐng)參考表1）

1. 接種細(xì)胞

對(duì)于貼壁細(xì)胞，轉(zhuǎn)染前18-24 h進(jìn)行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時(shí)的密度大約在80%左右。對(duì)于懸浮細(xì)胞，轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進(jìn)行鋪板，每500 µL生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類(lèi)型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響，建議初次使用時(shí)設(shè)置梯度進(jìn)行優(yōu)化最佳使用量。

2. 準(zhǔn)備EZ Trans-DNA復(fù)合物

（1）對(duì)于每孔細(xì)胞，將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），混勻。

（2）對(duì)于每孔細(xì)胞，將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），輕輕混勻。

【注】：無(wú)血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因?yàn)镋Z Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過(guò)程不能含有血清。

（3）將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進(jìn)行。

（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。

3. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細(xì)胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。

（2）在37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對(duì)轉(zhuǎn)入基因表達(dá)分析。

【注】：篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后，將細(xì)胞傳代至新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中（將細(xì)胞稀釋10倍以上），在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。