CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒優(yōu)勢與使用方法

更新時(shí)間：2024-01-26

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Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度的比色檢測試劑盒。檢測原理為：WST-8在電子耦合劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（formazan，參考圖1)，生成的甲臜的顏色深淺與細(xì)胞增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450nm 波長處測定OD 值，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞增殖測定，細(xì)胞毒性的檢測，藥物篩選，以及細(xì)胞生長抑制檢測等。

CCK-8法的優(yōu)勢

檢測方法	MTT法	XTT法	WST-1法	CCK-8法
產(chǎn)品性狀	粉末	2瓶溶液	溶液	1瓶溶液
使用方法	配成溶液后使用	現(xiàn)配現(xiàn)用	即開即用	即開即用
檢測靈敏度	高	很高	很高	高
檢測時(shí)間	較長	較短	較短	最短
檢測波長	560-600nm	420-480nm	420-480nm	430-490nm
細(xì)胞毒性	高，細(xì)胞形態(tài)*消失	很低，細(xì)胞形態(tài)不變	很低，細(xì)胞形態(tài)不變	很低，細(xì)胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性	一般	較差	一般	很好
批量樣品檢測	可以	非常適合	非常適合	非常適合
便捷程度	一般	便捷	便捷	非常便捷

運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期24個(gè)月。【注】：反復(fù)凍融會造成測定背景OD值升高。
使用方法

以96孔板為例，96孔板中每孔接種100 μL的細(xì)胞懸液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 h。
向每孔加入10 μL不同濃度的待測物質(zhì)。如果僅測定細(xì)胞活性，則不需要2~3步驟，直接從第四步操作。
將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (依據(jù)待測藥物而定)。
向每孔加入10 μL CCK-8溶液 (注意不要產(chǎn)生氣泡，輕輕混勻)。
將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育適當(dāng)時(shí)間（一般0.5~2 h）。
酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光值。

注意事項(xiàng)

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
建議調(diào)試合適的接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8溶液后培養(yǎng)的時(shí)間。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞至少1000 個(gè)/ 孔(100 μL 培養(yǎng)基)，白細(xì)胞至少2500 個(gè)/ 孔(100 μL 培養(yǎng)基)。建議實(shí)驗(yàn)前設(shè)定幾個(gè)不同細(xì)胞數(shù)量的梯度孔進(jìn)行條件測試，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間和處理方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況而定，加入CCK-8溶液后（加入體積為每孔細(xì)胞培養(yǎng)液體積的10%），在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育，不同時(shí)間點(diǎn)后測450 nm處的吸光值(CCK-8敏感性高，一些細(xì)胞0.5 h后就可以測定第一次)。
CCK-8試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化反應(yīng)，如果待檢測體系中有較多還原劑（或抗氧化劑）會造成背景OD值升高，干擾檢測結(jié)果。如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑，請檢查背景的OD值，設(shè)法先去除還原劑干擾。例如，可在加入CCK-8溶液之前更換新鮮的培養(yǎng)基，以去除待測藥物的影響。當(dāng)待測藥物影響比較小時(shí)，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入待測藥物后的空白吸收即可。
進(jìn)行藥物抑制實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果藥物中含有金屬，如Pb2+、Fe2+、Cu2+等金屬會對CCK-8 Solution的顯色反應(yīng)產(chǎn)生影響，從而導(dǎo)致檢測的靈敏度降低。
如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測。細(xì)胞培養(yǎng)基酚紅不影響測定結(jié)果。
為使CCK-8試劑盒培養(yǎng)基充分混勻，減少CCK-8在移液器上的殘留，建議加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑，混勻后加樣。
若暫時(shí)不測定OD值，可以向每孔中加入0.1 M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液，室溫避光保存，24 h 內(nèi)檢測，吸光度不會受到影響。(加入1% SDS 溶液的體積與加入CCK-8溶液的體積相同)。
如果吸光值很低，可以適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量或者延長加入CCK-8溶液后孵育的時(shí)間。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。