轉(zhuǎn)染試劑原理及操作方法

　　轉(zhuǎn)染試劑是由它的體外轉(zhuǎn)染試劑加上一些專(zhuān)有的肽配制而成。與傳統(tǒng)的配方相比，這款運(yùn)用了新的化學(xué)試劑，DNA濃縮組被顯著地釋放。主鏈上連上具有屏蔽效應(yīng)的肽，用來(lái)防止被體內(nèi)環(huán)境的干擾，獲得高的體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率。
 

　　轉(zhuǎn)染試劑指真核細(xì)胞由于外源DNA摻入而獲得新的遺傳標(biāo)志的過(guò)程。哺乳動(dòng)物的轉(zhuǎn)染技術(shù)在60年代末70年代初即已引入。DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)的發(fā)展對(duì)現(xiàn)代分子生物學(xué)產(chǎn)生了巨大的影響?；蜣D(zhuǎn)染技術(shù)不僅是研究轉(zhuǎn)基因和基因表達(dá)的重要工具，而且是目前基因治療的關(guān)鍵步驟。理想的基因轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)該具有如下特點(diǎn)：1.轉(zhuǎn)染；2.安全；3.低細(xì)胞毒性；4.方法簡(jiǎn)單；5.省時(shí)、經(jīng)濟(jì)。
 

　　轉(zhuǎn)染試劑工作原理：脂質(zhì)體帶正電，可以靠靜電作用結(jié)合到DNA的磷酸骨架上以及帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面。使用陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑，DNA并沒(méi)有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成DNA-陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物。
 

　　轉(zhuǎn)染試劑操作簡(jiǎn)單、快速，為操作者節(jié)約大量操作時(shí)間。
 

　　1. 以24孔細(xì)胞板轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)為例，推薦一次(即每孔)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的低內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA用量為2µg、轉(zhuǎn)染試劑用量為3~5µl(轉(zhuǎn)染試劑的zui適用量需要根據(jù)不同細(xì)胞和不同培養(yǎng)基來(lái)優(yōu)化，但理論上不超出3~5µl范圍)。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用無(wú)菌生理鹽水稀釋質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑即可。
 

　　2. 為獲得zui高轉(zhuǎn)染效率并盡可能降低細(xì)胞毒性，建議轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在50～80%范圍內(nèi)，而且在不影響轉(zhuǎn)染效率的前提下，盡可能減少轉(zhuǎn)染試劑的用量。
 

　　3. 本品極大簡(jiǎn)化了轉(zhuǎn)染步驟，轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)?；旌虾鬅o(wú)需室溫靜置孵育，可直接加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，而且無(wú)需在轉(zhuǎn)染后補(bǔ)加血清或更換培養(yǎng)基。
 

　　4. 如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诤Y選抗藥性穩(wěn)定細(xì)胞系，可在細(xì)胞傳代后直接進(jìn)行轉(zhuǎn)染試劑實(shí)驗(yàn)，從而節(jié)省了18~24小時(shí)的轉(zhuǎn)染前細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間！