介紹幾種常見的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法

　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為三大類：化學(xué)法、物理法及生物學(xué)法。但是沒有一種方法是放之四海而皆準(zhǔn)的，即沒有任何方法適用于所有細(xì)胞和所有實(shí)驗(yàn)。因而只有依據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求選擇理想的方法，才能獲得漂亮的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

下面介紹幾種常見的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法：

　　1、DEAE-右旋糖苷法

　　常言道：同性相斥，異性相吸。因而，當(dāng)帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸中帶負(fù)電的磷酸骨架相遇，妥妥的火花四射，而后會被細(xì)胞膜抱團(tuán)相擁并通過細(xì)胞內(nèi)吞作用迎客到家。該法可用于瞬時轉(zhuǎn)染，操作相對簡單、結(jié)果可重復(fù)，但是對細(xì)胞有一定的毒副作用，且轉(zhuǎn)染時需要血清。

　　2、磷酸鈣法

　　通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見”的磷酸鈣-DNA共沉淀，可使共沉淀中濃縮DNA分子與細(xì)胞表面結(jié)合并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。該法可用于瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結(jié)果容易出現(xiàn)差異，且對許多類型的細(xì)胞培養(yǎng)物(尤其是原代細(xì)胞)具有細(xì)胞毒性，轉(zhuǎn)染效率較差。

　　3、人工脂質(zhì)體法

　　帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物，進(jìn)而可被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染。這種方法幾乎適用于所有細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高、重復(fù)型好，但轉(zhuǎn)染時需要去除血清，轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大。

　　4、電穿孔法

　　有時，細(xì)胞有些“油鹽不進(jìn)”，就是不開放門戶給核酸放行，此時各位小伙伴可采用一些強(qiáng)硬手段—電穿孔法。此法利用高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，使得DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入穩(wěn)定/瞬時性轉(zhuǎn)染，適用于所有類型的細(xì)胞，但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大，且需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。

　　其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱為粒子轟擊，可將包裹著核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細(xì)胞內(nèi)，適用于瞬時性轉(zhuǎn)染。該技術(shù)可需要昂貴的設(shè)備，且細(xì)胞死亡率較高。而后者則是通過精細(xì)的注射針將核酸送入胞漿中，一次只能輸送一個細(xì)胞中，適用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物或輸送人工染色體。