PCR原理及反應(yīng)步驟

　　PCR的原理：
 

　　多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction)簡(jiǎn)稱(chēng)PCR技術(shù)，是近30多年發(fā)展起來(lái)的一種體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù)，可在數(shù)小時(shí)之內(nèi)對(duì)僅有幾個(gè)拷貝的基因放大千萬(wàn)倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？
 

　　PCR技術(shù)實(shí)際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應(yīng)條件下，通過(guò)DNA聚合酶的酶促反應(yīng)完成DNA擴(kuò)增的過(guò)程。
 

　　PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。PCR反應(yīng)分為三步：
 

　　1)變性：通過(guò)加熱時(shí)DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，雙鏈解離成單鏈DNA；
 

　　2)退火：當(dāng)溫度突然降低時(shí)由于模板分子結(jié)構(gòu)較引物復(fù)雜的多，而且反應(yīng)體系中引物DNA量遠(yuǎn)大于模板DNA，使引物和其互補(bǔ)的模板在局部形成雜交鏈，而模板DNA雙鏈之間互補(bǔ)的機(jī)會(huì)較少；
 

　　3)延伸：在DNA聚合酶和四種脫氧核糖核苷酸第五以及Mg2+存在的條件下，5’→3’的聚合酶催化以引物為起點(diǎn)的DNA鏈延伸反應(yīng)。
 

　　4)3步為一個(gè)循環(huán)，每一個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物可以作為下一個(gè)循環(huán)的模板，30個(gè)循環(huán)左右，介于兩個(gè)引物之間的特異性DNA片段得到了大量的復(fù)制，數(shù)量可達(dá)2×107個(gè)拷貝。