胎牛血清選擇及使用常見問題解析

1、實驗室如何選擇適合的血清?

在國內*的血清是GIBCO和HYCLONE，度和使用范圍非常普遍，但是價格普遍偏貴。life-ilab這個品牌是李記生物的自主品牌，國外直接貼牌，在20多個品牌中選擇質量、批間差異小的大量采購，很大程度降低批次間差異。研發(fā)小組及廣大的科研客戶使用反饋效果很好，價格實惠！對于特殊的細胞李記生物采購GIBCO或HYCLONE血源，同樣經過檢測，用實在的實驗數(shù)據(jù)確定采購批次，而不是迷信品牌。

2、胎牛血清和小牛血清的區(qū)別及注意事項？

    來源不同：新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14天的小牛，而胎牛血清(FBS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清。

組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組份與比例不同，

使用濃度不同：一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

注意事項：某些細胞必需胎牛血清才能生長，而有些細胞只需小牛血清即可。

3、怎樣儲存和解凍血清避免產品質量受損?

    首先需要將血清產品從冷凍箱中取出，先放置于2～8℃冰箱使之溶解，然后放在室溫中使之全融。在融解過程中需要不定時的輕微晃動，使血清成分均勻，減少融化過程中產生沉淀機會。

    其次，血清長時間存放于2-8℃時，可能會聚集各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)而形成沉淀或可見的混濁。因此，我們推薦長期儲存血清需在-20℃以下，并避免反復凍融。

    后，若短期使用存放于4℃時，請勿超過一個月。若在實驗中血清未能一次用完一瓶血清，建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀龋ㄓ捎谘褰Y凍時體積會增加約10%，必須預留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形），再放回冷凍。

4、血清中包含絮狀沉淀是什么？怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。融化過程產生沉淀是正常特性，不會影響產品性質。想要去除這些絮狀沉淀物，有兩種方法：1、可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內一起過濾(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。2、將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里，大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

5、如何避免血清中產生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產生：

(1)在2～8℃解凍血清時，請將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。同樣原理，分裝凍存的時候，須輕微的均勻搖晃，避免產生氣泡，使溫度與成分均一！

(2)勿直接由-20℃直接放置于37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。

(3)勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

(4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

(5)若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

6、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

    一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，應該在兩到三周內使用完它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

7、為什么要熱滅活血清?

     事實上，大部分細胞培養(yǎng)不需要滅火血清，僅在培養(yǎng)部分特殊細胞時進行滅火。如在免疫學研究，培養(yǎng)ES細胞、平滑肌細胞等特殊細胞時，推薦使用熱滅活血清。因為加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。

8、有必要做熱滅活嗎?

在大多數(shù)情況下不需要熱滅活處理，不但節(jié)省時間，更確保血清的質量!因為經過熱處理的血清，沉淀物的行程會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)有很多的“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

9、血清需要做支原體檢測嗎

支原體污染是世界性問題，有報道指出，支原體輕微污染即可影響200多個基因的表達，Nature雜志從2013年起，要求涉及細胞培養(yǎng)的研究，必須進行支原體檢測。李記生物每批次血清均用支原體檢測試劑進行檢測，可以檢出99.9%的已發(fā)現(xiàn)支原體種類，客戶不需要另外檢測，但我們仍然強烈建議培養(yǎng)細胞中定期進行支原體檢測，以排除實驗操作中人為帶入支原體污染。